基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的核酸探針技術(shù)能靈敏、特異地檢測(cè)目標(biāo)DNA序列，然而這些核酸探針，如Taqman探針、分子信標(biāo)探針等一般都需要熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)的化學(xué)修飾，合成成本相對(duì)高昂，所用到的儀器如實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，較為高端，因此這些方法的普適性不強(qiáng)。
中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所唐卓課題組的巴基斯坦籍博士后Afshan Yasmeen等人通過研究建立了一種新的基于串聯(lián)PCR和綠色熒光蛋白（GFP）RNA類似物以及小分子熒光基團(tuán)的特異性DNA檢測(cè)方法。該檢測(cè)方法使用小分子熒光基團(tuán)作為傳感器，不需要對(duì)探針進(jìn)行化學(xué)修飾，靈敏度高，特異性強(qiáng)，且能通過靈活選擇不同RNA適配體和小分子熒光基團(tuán)得到不同熒光報(bào)告信號(hào)，來實(shí)現(xiàn)單個(gè)或多個(gè)目標(biāo)DNA的檢測(cè)。
該方法原理如下：首先，在對(duì)目標(biāo)DNA進(jìn)行PCR時(shí)，由于Taq DNA聚合酶具有5’-3’的外切酶活性，它能在引物的延伸過程中于探針和目標(biāo)DNA雜交的位置將探針的5’突出末端剪切，產(chǎn)生一個(gè)小DNA片段。此片段釋放出來后可作為反應(yīng)體系中另一個(gè)DNA模板——報(bào)告模板的引物，進(jìn)一步啟動(dòng)報(bào)告模板的PCR。報(bào)告模板為編碼RNA適配體（綠色熒光蛋白（GFP）RNA類似物）的序列，在PCR結(jié)束后，報(bào)告模板的PCR產(chǎn)物可以轉(zhuǎn)錄mRNA，在相應(yīng)的熒光基團(tuán)存在下可以產(chǎn)生熒光信號(hào)。該方法已成功應(yīng)用于大腸桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢測(cè)中。
該工作已發(fā)表在ACS Chemical Biology。
檢測(cè)原理
