專利名稱：一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌及其制劑，該海洋細(xì)菌為從紅樹植物-老鼠簕(J can thus i licifolius)葉片內(nèi)分離獲得的解淀粉芽孢桿菌iBaci Ilusamyloli quefaci ens )。該菌株在NA培養(yǎng)基上菌落呈淺黃色,不透明,表面粗糙干燥，邊緣不整齊，直桿狀，革蘭氏染色陽性，產(chǎn)芽孢，芽孢橢圓形，中生或近中生。菌株生長溫度范圍為15-50°C，生長的pH范圍為5. 0-9. O,能耐受10. 0%的氯化鈉。該菌株可在香蕉體內(nèi)及根土壤中定殖，并可分泌產(chǎn)生抑制多種植物病原真菌的抗菌蛋白；
液體菌劑制備將BaL3菌株接種于PBY培養(yǎng)基(牛肉膏5. O g，蛋白胨10.0 g，NaCl5. O g，酵母膏 5.0 g，葡萄糖 10.0 g，pH 7.5，水 1000 mL)上，25_28°C下 180_200r/min 振蕩發(fā)酵培養(yǎng)48-36小時，其活菌總濃度為I X IO9-1 X 1010cfu/ml ；
固體菌劑制備取上述海洋細(xì)菌BaL3菌株液體菌劑，按10-20% (V/W)的接菌量于固體培養(yǎng)基[貝殼粉92-96%、米糠1-3%、麩皮3-5%、5-10%、石灰水5-20% (V/W)]中，25-28°C下發(fā)酵培養(yǎng)24-48小時，然后干燥后制成固體菌劑，固體菌劑成品中活菌總濃度為lX109-lX1012cfu/g。實施例2
海洋細(xì)菌BaL3菌株在香蕉體內(nèi)及根際土壤中的定殖
取BaL3菌株培養(yǎng)液，用澆灌法將菌液澆灌于香蕉苗根部，分離結(jié)果表明，處理30天后可從香蕉假莖內(nèi)、根表及其根際土壤中均分離到該菌株，說明該菌株可在香蕉假莖內(nèi)、根表及其根際土壤中定殖存活30天以上。實施例3
海洋細(xì)菌BaL3菌株制劑對室內(nèi)盆栽香蕉枯萎病的防治和對香蕉的促生作用選取6-7片葉健壯的香蕉組培苗，移栽至裝有滅菌土的圓盆缽(160X220 mm)中，分別按如下6組進(jìn)行處理(A)移栽后立即用BaL3菌株液體制劑(濃度為IO8 cfu/mL)灌根(50mL/株)，20 d重復(fù)處理一次；(B)移栽前用BaL3菌株液體制劑噴葉、移栽時用BaL3菌株液體制劑浸根2 h ；(C) (A)+ (B)處理；(D)移栽前用BaL3菌株固體制劑與土壤攪拌處理(100 g/株)，之后按處理(A)進(jìn)行處理；CK1 :清水對照；CK2 :病原菌處理對照。每處理10盆(株)，于移栽后第7、15和30 d灌根接種香蕉枯萎病菌孢子懸浮液(濃度為IO7個/mL)，接種量為100 mL/株。防病作用調(diào)查結(jié)果表明(表1)，接種病原菌2個月后，單獨接種香蕉枯萎病原菌處理(CK2)開始出現(xiàn)病株，而制劑處理均未見發(fā)??；接種病原菌4個月和6個月后CK2發(fā)病率為60%和100%，而同期AiL3菌株處理的香蕉苗發(fā)病度均在10%和20%以下，其中噴葉和浸根再灌根處理(C)均未見發(fā)病。
權(quán)利要求
1.一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑，其特征在于該制劑所利用的海洋細(xì)菌BaL3菌株為從紅樹植物-老鼠簕葉片內(nèi)分離獲得的解淀粉芽孢桿菌amyloliquefaciens，2Q\2^\QH 29日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC No. 6718。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑，其特征在于該菌劑的使用方法是于香蕉移栽時將菌株固體菌劑施入根部土壤，用量80-120Kg/畝，或用菌株液體菌劑，稀釋10-50倍灌根，然后每間隔30-60天用菌株液體菌劑灌根，或?qū)⒕旯腆w菌劑施入根部土壤。
3.權(quán)利要求1所述海洋細(xì)菌BaL3菌株及其制備的生物制劑。
4.權(quán)利要求2所述生物制劑在防治香蕉枯萎病等方面的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述的一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑液體菌劑的制備方法，其特征在于 將海洋細(xì)菌BaL3菌株接種于PBY培養(yǎng)基牛肉膏5.0 g，蛋白胨10.0 g，NaCl 5.0 g，酵母膏 5.0 g，葡萄糖 10.0 g，pH 7. 5，水 1000 mL，25_28°C下 180_200r/min 振蕩發(fā)酵培養(yǎng)48-36小時，其活菌總濃度為lX109-lX101Qcfu/ml。
6.權(quán)利要求1所述的一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑固體菌劑的制備方法，其特征在于 將權(quán)利要求5所述的海洋細(xì)菌BaL3菌株液體菌劑，按10-20% (V/W)接菌量接種于固體培養(yǎng)基中，25-28°C下發(fā)酵培養(yǎng)24-48小時，干燥后制成固體菌劑，固體成品中活菌總濃度為 lX109-lX1012cfu/go
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑固體菌劑的制備方法，其特征在于所述的菌株固體培養(yǎng)基的配方為 60-100目貝殼粉 70-80% 米糠10-15% 麩皮5-15% 5-15% 的石灰水 5-15% (V/W)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑，屬于植物保護(hù)領(lǐng)域。該海洋細(xì)菌BaL3菌株為解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)。將該菌接種于PBY培養(yǎng)基25-28℃下180-200r/min振蕩培養(yǎng)36-48小時，即得液體菌劑，其活菌總濃度為1×109-1×1010cfu/ml。取菌株液體菌劑接種于固體培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)24-48小時，干燥后制成固體菌劑，其活菌總濃度為1×109-1×1012cfu/g。制劑對香蕉枯萎病溫室防效80-100%，田間防效46.4%-72.3%，并可促進(jìn)香蕉假莖增粗，葉片增綠，提早抽蕾。該制劑可灌根或噴霧防病使用，也可作為生物肥料使用。
文檔編號A01N63/02GK103004886SQ20121052893
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月11日
發(fā)明者何紅 申請人:廣東海洋大學(xué)