一種環(huán)烯醚萜類化合物及其制備方法、制劑與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種環(huán)烯醚萜類化合物及其制備方法、 制劑與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 煙草花葉病毒（azasaic κ/τ?Λ?，TMV)是煙草花葉病等的病原體。TMV的寄 主廣泛，能侵染30個(gè)科的300多種植物，在煙草、番茄等糧經(jīng)作物上危害嚴(yán)重，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn) 造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，被列為分子植物病理學(xué)上最重要的十種植物病毒之首。在目前的農(nóng) 業(yè)生產(chǎn)中，化學(xué)農(nóng)藥防治TMV應(yīng)用最為廣泛，但化學(xué)防治效果有限，且易造成農(nóng)殘超標(biāo)，無 法滿足農(nóng)業(yè)可持續(xù)性發(fā)展的要求。因此迫切需要開發(fā)新型抗病毒制劑。
[0003] 植物在進(jìn)化過程中合成了類型豐富的具有抗微生物活性的次生代謝產(chǎn)物，它們可 以選擇性的抵御包括TMV在內(nèi)的病原物的侵害。由于是植物本身產(chǎn)生的抗病毒物質(zhì)，植物 源病毒抑制劑對(duì)寄主本身毒性小或沒有毒性，作用機(jī)制獨(dú)特且資源豐富。云南素有"植物王 國"的美譽(yù)，植物中的生物活性天然產(chǎn)物及其衍生物超過40萬種，目前已知173種植物含抗 病毒活性物質(zhì)。因此，篩選新型植物源抗病毒制劑具有重要意義。
[0004] 病毒對(duì)植物產(chǎn)生危害的過程可分為侵染寄主、體內(nèi)復(fù)制和癥狀表達(dá)三個(gè)部分。因 此，對(duì)其中任何部分的抑制均可減輕植物病毒的危害。另外有些活性物質(zhì)雖然對(duì)這三個(gè)部 分沒有作用，但卻能激活寄主產(chǎn)生系統(tǒng)抗性。同時(shí)，許多活性物質(zhì)表現(xiàn)的抗病毒活性可能是 其中一種或多種機(jī)制共同起作用的結(jié)果。已有研究表明，許多活性物質(zhì)防治TMV表現(xiàn)在多 個(gè)方面，如對(duì)TMV侵染的鈍化作用、對(duì)TMV侵染的預(yù)防保護(hù)作用以及對(duì)TMV侵染的治療作用 等。
[0005] 龍膽科獐牙菜屬植物主要產(chǎn)于云南、貴州、四川等地，是西南少數(shù)民族 常用的植物藥源。該屬植物共有170種，我國約有80種，主要分布在西南地區(qū)，僅云南就 有38種。該屬藥用植物大多具有清熱利膽、強(qiáng)心、舒肝健胃、解毒等功效，用于治療肝炎、黃 疸型肝炎、肝膽等疾病。本課題組前期曾報(bào)道西南獐牙菜中的化合物龍膽苦苷和獐芽菜苷 能夠抑制TMV的侵染，表明該屬植物中的化合物有較好的抗病毒活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種環(huán)烯醚萜類化合物；第二目的在于提供所述的環(huán) 烯醚萜類化合物的制備方法；第三目的在于提供所述的環(huán)烯醚萜類化合物的制劑；第四目 的在于提供所述的環(huán)烯醚萜類化合物的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的第一目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的環(huán)烯醚萜類化合物是從西南獐牙菜中分 離得到，其分子式為C16H22O11，結(jié)構(gòu)式為：
該化合物命名為：Eustomoside ο
[0008] 本發(fā)明的第二目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，是以西南獐牙菜為原料，經(jīng)原料處理、浸膏提 取、有機(jī)溶劑萃取、洗脫、分離步驟制備得到，具體包括： Α、原料處理：取陰干的西南獐牙菜粉碎過50~100目篩備用； Β、浸膏提?。簩⑶疤幚砗蟮奈髂镶啦酥屑尤牍桃后w積比2~5倍的體積百分濃度 75~85%的甲醇超聲提取5~10次，每次3~5h，合并提取液，過濾，減壓濃縮提取液至相對(duì)密度 為I. 2~1. 3得到浸膏； C、 有機(jī)溶劑萃?。航嘀屑尤牍桃后w積比1~3倍的水?dāng)嚢?~30min至呈懸浮狀，用與水 等體積的體積濃度95~100%的二氯甲烷溶液萃取2~5次，每次15~40min，將每次水溶萃取 液合并得到萃取液a ; D、 洗脫：將萃取液a上MCI柱，用體積濃度70~80%的甲醇溶液洗脫，收集得到洗脫液 b，洗脫液b上大孔樹脂柱，以體積配比0 :1~1:0的甲醇-水溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集各部分 洗脫液并濃縮，合并相同的部分； E、 分離純化：D步驟洗脫液的0:1部分經(jīng)半制備柱分離純化，即得到所述的環(huán)烯醚萜類 化合物--Eustomoside0
[0009] 本發(fā)明的第三目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的環(huán)烯醚萜類化合物中加入藥用輔料和/ 或賦形劑制成水劑、片劑、顆粒劑或微乳劑。
[0010] 本發(fā)明的第四目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的環(huán)烯醚萜類化合物在制備防治TMV藥物 中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明運(yùn)用現(xiàn)代分離技術(shù)從西南猜牙菜（ciflcia Burk)中分離得到一 種環(huán)稀醚砲類化合物Septemfidoside。實(shí)驗(yàn)證明Septemfidoside具有較高的抑制TMV侵 染的活性，其抑制效果接近市售抗煙草花葉病藥劑寧南霉素。本發(fā)明藥物制劑不僅對(duì)人畜 無毒、無害，使用安全可靠，而且對(duì)防治TMV有較好的效果，可用于制備防治TMV的藥物制 劑。
【附圖說明】
[0012] 圖1為本發(fā)明應(yīng)用效果對(duì)比圖； 其中：左圖為本發(fā)明化合物與對(duì)照組效果對(duì)比；右圖為寧南霉素與對(duì)照組效果對(duì)比。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何方式對(duì)本發(fā)明加以 限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0014] 本發(fā)明所述的環(huán)烯醚萜類化合物，是從西南獐牙菜中分離得到，其分子式為 C16H22O11,結(jié)構(gòu)式為：
該化合物命名為：Eustomoside 〇
[0015] 本發(fā)明所述的環(huán)烯醚萜類化合物的制備方法，是以西南獐牙菜為原料，經(jīng)原料處 理、浸膏提取、有機(jī)溶劑萃取、洗脫、分離步驟制備得到，具體包括： A、 原料處理：取陰干的西南獐牙菜粉碎過50~100目篩備用； B、 浸膏提?。簩⑶疤幚砗蟮奈髂镶啦酥屑尤牍桃后w積比2~5倍的體積百分濃度 75~85%的甲醇超聲提取5~10次，每次3~5h，合并提取液，過濾，減壓濃縮提取液至相對(duì)密度 為I. 2~1. 3得到浸膏； C、 有機(jī)溶劑萃取：浸膏中加入固液體積比1~3倍的水?dāng)嚢?~30min至呈懸浮狀，用與水 等體積的體積濃度95~100%的二氯甲烷溶液萃取2~5次，每次15~40min，將每次水溶萃取 液合并得到萃取液a ; D、 洗脫：將萃取液a上MCI柱，用體積濃度70~80%的甲醇溶液洗脫，收集得到洗脫液 b，洗脫液b上大孔樹脂柱，以體積配比0 :1~1:0的甲醇-水溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集各部分 洗脫液并濃縮，合并相同的部分； E、 分離純化：D步驟洗脫液的0:1部分經(jīng)半制備柱分離純化，即得到所述的環(huán)烯醚萜類 化合物--Eustomoside0
[0016] 0步驟中所述的大孔樹脂柱為0900、0130、0101、0201或0301中的一種。
[0017] D步驟中所述的甲醇-水溶液的體積配比為0:1，9:1，8:2,6:4,3:7和1:0。
[0018] E步驟中所述的半制備柱為艾杰爾半制備柱、HPLC半制備柱或日本唯美希半制備 柱中的一種。
[0019] 所述的艾杰爾半制備柱進(jìn)行純化，采用甲醇/水溶液進(jìn)行洗脫。
[0020] 本發(fā)明所述的環(huán)烯醚萜類化合物的制劑為所述的環(huán)烯醚萜類化合物中加入藥用 輔料和/或賦形劑制成水劑、片劑、顆粒劑或微乳劑。
[0021] 本發(fā)明的Eustomoside藥物組合物含Eustomoside活性成分0· 5~90%，其余為藥 物學(xué)上可接受的，對(duì)人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0022] 所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥 物制品輔劑。采用制藥和食品領(lǐng)域公認(rèn)的方法制備成各種劑型、如液體制劑（注射劑、混懸 劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑等）、固體制劑（片劑、膠囊劑、顆粒劑，沖劑等）、噴劑、氣霧劑等。
[0023] 上述制劑中可含有輔助物質(zhì)、穩(wěn)定劑、助濕劑和其他常用的添加劑，如淀粉、蛋白 粉、果膠、蔗糖、糊精、硬脂酸鎂、甘露醇、十二烷基苯磺酸鈉等。上述的制劑可按照各種制劑 常規(guī)的制備工藝制成。
[0024] 本發(fā)明的應(yīng)用為所述的環(huán)烯醚萜類化合物在制備防治TMV藥物中的應(yīng)用。
[0025] 在制備防治煙草花葉病毒病應(yīng)用中的Eustomoside溶液濃度為5~50 μ g/ml。
[0026] 下面以實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明： 實(shí)施例1 取陰干的西南獐牙菜粉碎，粗粉碎過50目篩；用80%甲醇提取5次，每次2 h ;合并提 取液，過濾除渣，合并濾液，然后減壓濃縮得相對(duì)密度1. 2的浸膏；浸膏加入1倍體積的水?dāng)?拌至呈懸浮狀，用濃度98%二氯甲烷溶液萃取2次，每次15 min ;合并萃取液，過MCI脫 色，用體積濃度75%的甲醇洗脫，收集洗脫液；再上D900大孔樹脂柱脫糖，用體積配比0:1， 9:1，8:2，6:4，3:7和1:0的甲醇/水（V/V )溶液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)TLC監(jiān)測(cè)，合并相同 的部分，濃縮得浸膏，0:1部分上HPLC進(jìn)行分離，用70%的甲醇水溶液洗脫，最后艾杰爾半制 備柱進(jìn)行純化，用70%的甲醇水溶液洗脫，得到Eustomoside化合物，本實(shí)施例制備得到的 化合物鑒定結(jié)果如下： 白色粉末，分子式為 C16H22O11; 1H-NmrGOOMHz, CD3OD) : δ H: 2. 02 (1H, ddd, J=15. 0, 8. 0, 2. 0 Hz, H-6b), 2. 30(1Η, ddd, J=15. 0, 1